數(shù)字PCR的運行階段

　　數(shù)字PCR是一種核酸檢測和定量的新方法。同傳統(tǒng)PCR以及qPCR相比，增加了一步分液的操作，將幾十微升的已經(jīng)配好的包含有引物、模板、buffer、酶等組分的PCR反應(yīng)體系分隔成了眾多微小的、獨立的反應(yīng)體系，這樣能夠直接數(shù)出DNA分子的個數(shù)，對起始樣品定量，通過將一個樣本分成幾萬到幾百萬份，分配到不同的反應(yīng)單元，每個單元包含一個或多個拷貝的目標分子( DNA 模板) ，在每個反應(yīng)單元中分別對目標分子進行PCR擴增，擴增結(jié)束后對各個反應(yīng)單元的熒光信號進行統(tǒng)計學分析。如下圖：
 

　　PCR 運行可以分為三個階段：
 

　　指數(shù)期
 

　　每個循環(huán)積聚的產(chǎn)物準確加倍(假定 100% 反應(yīng)效率)。該反應(yīng)具有高度特異性和準確度。出現(xiàn)指數(shù)式擴增，因為所有試劑均新鮮可用，反應(yīng)的動力學推動反應(yīng)有利于擴增子加倍。
 

　　線性期(高變異性)
 

　　隨著反應(yīng)繼續(xù)，一些試劑因擴增而被消耗。反應(yīng)開始減緩，并且每個循環(huán)的 PCR 產(chǎn)物不再加倍。
 

　　平臺期(終點：使用傳統(tǒng)方法進行凝膠檢測)
 

　　反應(yīng)停止，不再產(chǎn)生更多產(chǎn)物，并且如果放置時間夠長，PCR 產(chǎn)物將開始降解。因為每個樣品具有不同的反應(yīng)動力學，所以每支試管或每個反應(yīng)將在不同的時間點進入平臺期。在平臺期可以看到這些差異。在平臺期內(nèi)，傳統(tǒng) PCR 進行測量，又稱為終點檢測。
 

　　數(shù)字PCR檢測的是游離DNA，采血管為游離DNA管，采樣5-10ml。檢測過程包括核酸提取、芯片制備、PCR擴增、芯片閱讀、結(jié)果分析，實現(xiàn)全程基本自動化、封閉式操作，避免污染。無需培養(yǎng)，節(jié)省時間；高靈敏度，提高檢出率；多色熒光檢測，一管血可檢測23個靶標，節(jié)省寶貴樣本，幫助解決“檢出率低”和“檢測周期長”兩大痛點，達到早期診斷、療效監(jiān)測的目的。